用LR進行轉染時,首先需優化轉染條件,應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等,對每批LR都要做:*,先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間,DNA可從1~5μg和孵育時間6小時開始,按這兩個參數繪出相應LR需用量的曲線,再選用LR和DNA兩者*的劑量,確定出轉染時間(2~24小時)。因LR對細胞有一定的毒性,轉染時間以不超過24小時為宜。
細胞種類:COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一種細胞均可作為受體細胞。
脂質體2000轉染方法原理
脂質體2000轉染方法原理:脂質體2000作為體內和體外輸送載體的工具,已經研究的十分廣泛,用合成的陽離子脂類包裹DNA,同樣可以通過融合而進人細胞。使用脂質體將DNA帶人不同類型的真核細胞,與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復性。
中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電 的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。